摘要： 依据《中华人民共和国药典》2025年版（ChP 2025）最新技术规范，本文系统阐述紫外可见分光光度法在中成药检测中的标准化操作流程与方法学验证要求。聚焦含量测定、安全性指标及饮片质量控制三大领域，整合通则0401《紫外-可见分光光度法》、<9101>分析方法验证指导原则及品种正文修订内容，为药品生产企业、检验机构提供法定标准操作指南。

关键词： 2025年版中国药典；紫外可见分光光度法；中成药；总黄酮；真菌毒素；方法验证；系统适用性

一、 ChP 2025对紫外分光光度法的核心修订要求

（一）通则0401关键更新

溶剂空白控制强化

空白溶液必须使用与供试品同批配制溶剂，混合溶剂（如甲醇-水）需验证批次一致性。

新增溶剂吸光度限值：在检测波长处，1 cm光径吸光度≤0.01（如276 nm测黄芩苷时，70%甲醇需满足此要求）。

系统适用性试验标准化（强制每次检测前执行）

（二）品种正文与安全性重大变更

（1） 酒黄精：删除多糖含量测定（ChP 2025 一部 PXXX）  

（2）酸枣仁：  

   - 提取溶剂改为70%甲醇（原70%乙醇）  

   - 删除石油醚脱脂步骤  

（3）黄芪：新增赭曲霉毒素A检查（限值5.0 μg/kg）  

（4）麦冬：新增多效唑残留检测（限值0.1 mg/kg）  二、 标准化操作流程（2025版药典规范）

（一）黄芩苷含量测定（直接紫外法）

依据：ChP 2025 黄芩药材【含量测定】项

1、溶液制备

对照品溶液：精密称取黄芩苷对照品10 mg → 70%甲醇溶解定容至100 ml → 得100μg/ml储备液 → 稀释至20-50μg/ml工作液。

供试品溶液：取黄芩粉末0.3 g（过四号筛）→ 加70%甲醇40 ml → 超声提取（250 W, 40 kHz, 30 min） → 离心（4000 rpm, 10 min）→ 上清液70%甲醇定容至50 ml。

2、测定步骤

（1）开机预热30 min，钬玻璃验证279.4 nm波长准确性（偏差≤±0.5 nm）。  

（2）以同批70%甲醇为空白，校零（A≤0.01）。  

（3）测定对照品溶液吸光度（Aₛ）与供试品溶液吸光度（Aₓ）。  

3、计算

三、 关键注意事项与合规控制

（一）安全性指标检测联动方案

真菌毒素筛查（以黄芪赭曲霉毒素A为例）

前处理：样品→乙腈-水提取→免疫亲和柱净化→HPLC-FLD检测（λ_ex=333 nm, λ_em=477 nm）

UV-Vis辅助验证：标准储备液需在332 nm验证浓度（E¹%25px=5440）

植物生长调节剂检测（麦冬多效唑）

储备液浓度需经220 nm吸光度校准（ε=1.2×10⁴ L·mol⁻¹·cm⁻¹）

（二）饮片质量控制新要求

四、 方法学验证规范（ChP 2025通则<9101>）

紫外定量方法必须验证以下参数：

五、 技术争议点与解决方案

争议： 直接紫外法能否用于复方制剂？

解决方案：

按ChP 2025要求进行阴性辅料干扰试验（如双黄连口服液中蔗糖、糊精在276 nm的吸收验证）

采用二阶导数光谱法消除背景干扰（示例：丹参酮ⅡA在269 nm测定）

争议： 显色法（如总黄酮）是否被淘汰？

规范操作：

仅限药典收载方法（如淫羊藿总黄酮仍采用AlCl₃显色法，检测波长510 nm）

显色剂批次需进行吸光度一致性检查（RSD≤3%）

结论

紫外可见分光光度法在ChP 2025框架下呈现 “双轨制”演进：

简单成分：优先采用直接测定法（如黄芩苷、丹酚酸B），强化溶剂空白与系统适用性控制；

复杂基质：需联动HPLC/LC-MS进行安全性验证（真菌毒素、农残）；

传统显色法：仅限于药典明文收载品种，且需执行更严格的方法学验证。

参考文献：

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：2025年版. 北京：中国医药科技出版社，2024。

[2] 国家药监局. 2025年版药典实施通告（2024年第80号）。

[3] 2025年版《中国药典》将于2025年10月1日起正式实施‌，该时间由国家药监局和国家卫生健康委联合公告确认。 

科学数据声明：

1、本文数据来源：  

   - 设备：坤灵(KunlyTek) i8D型双光束紫外可见分光光度计  

   - 固件版本：V2.1.5（[版本说明]

   - 测试环境：25±1℃, RH45±10%  

2、法律地位：  

   > 本提及仅确认数据采集工具，不构成产品性能描述或担保。  

   > 实际效果受样品基质、操作规范及环境因素影响。 

3、用户义务：  

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